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    RIPA裂解液(中)

    P1018

    • 貨號: P1018
    • 商品名稱: RIPA裂解液(中)
    • 規格: 100ml
    • 價格: ¥180
    • 產品參數
    • 貨號: P1018
    • 商品名稱: RIPA裂解液(中)
    • 規格: 100ml
    • 價格: ¥180

    RIPA裂解液(中)

    【產品簡介】 

    RIPA裂解液是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣 品可以用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等。


    【貨   號】 P1018

     

    【規   格】 100ml/瓶 


    【保存條件】 -20℃保存,有效期為1年。

     

    【使用說明】 

    1.本產品是一款傳統的細胞組織裂解液,該緩沖液與許多應用相容包括SDS-PAGE,western blot,免疫沉淀和ELISA等。 

    2. 本產品的主要成分1%NP-40 ,0.5% Sodium deoxycholate,0.1% SDS以及含有EDTA,sodium fluoride,sodium orthovanadat等抑制劑,可以有效裂解蛋白樣品,所有步驟都需要在冰上進行。 

    3. 裂解得到的蛋白樣品,含有較高濃度的去垢劑,不建議用 Bradford 法測定蛋白濃度,可 以選用 BCA 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。


    對于培養細胞樣品: 

    溶液在使用前數分鐘內加入相應量的PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM或者根據實驗需要加入 適當的蛋白磷酸酶抑制劑混合物。 

    貼壁細胞:計數后去除培養液,細胞刮收集細胞,200g離心5min,用PBS、生理鹽水清洗多次。 按照2×10 6細胞約6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上,于搖床上裂解30分鐘。

     

    懸浮細胞:

    離心收集細胞,輕輕vortex或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照5×10 5細胞數每 孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液充分裂解細胞。裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。 

    可根據需要進行超聲裂解,充分裂解后,10000-14000g 4℃離心10分鐘,取上清,即為蛋白提取物,可進行后續操作。


    對于組織樣品: 

    a. 把組織放于預冷的PBS或生理鹽水中漂洗數次,將組織剪切成細小的組織碎片。對于心臟,腎臟等含血量豐富的應多次洗滌,確保無血液干擾。 

    b. 取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的最終濃度為lmM,或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。 

    c. 稱量組織,按照每20毫克組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,即組織凈重(mg): 裂解液(ul)=1:10的比例,然后立即進行勻漿。用玻璃勻漿器快速勻漿,直至肉眼觀察無明 顯組織塊,然后再冰上裂解30分鐘左右,直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨, 研磨充分后加入裂解液進行裂解。 d. 充分裂解后,10000-14000g 4℃ 離心5-10分鐘,取上清,即可進行后續蛋白分析等操作

     

    【注意事項】

    1.裂解樣品的所有步驟都需要在冰上進行。

    2.為了取得最佳的使用效果,盡量避免反復凍融,建議分裝保存使用

    3.為了您的身體安全及健康,請穿實驗服及佩戴一次性手套操作。

    4.本產品僅限于科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品。


    RIPA裂解液(中)
    P1018
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